上海藍基生物科技有限公司單克隆抗體提純實驗制備流程
1．材料
(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl緩沖液
20mMol/LNaCl
(2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl緩沖液
40mMol/LNaCl
(3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl緩沖液
80mMol/LNaCl
(4)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl緩沖液
(5)飽和硫酸銨液
(6)DEAE—纖維素柱
2．操作方法
?。?）小鼠腹水用冷PBS液稀釋4倍后，于1.00×105轉離心30min，去沉淀。
?。?）在4℃于上清中緩緩滴加飽和硫酸銨液，邊加邊攪拌，使溶液*終為50%硫酸銨濃度。
?。?）此溶液置冰中30min~60min，然后5000r/min離心10min，去上清。
?。?）將沉淀溶于Tris－HCl緩沖液（40mMol/LNaCl）中（溶液可能混濁）。
?。?）裝入透析袋于Tris－HCl緩沖液（20mMol/LNaCl）中透析除鹽。
?。?）離心去沉淀。
（7）溶液稀釋（1:100或更高倍稀釋）后，于280nm測蛋白含量，估計蛋白質含量1A280unit=0.8mg蛋白質一般每ml腹水中，含有總蛋白約25mg~36mg。
（8）過DEAE—纖維素柱：纖維素柱高40cm，以20mMol/LNaClTris緩沖液平衡。透析樣品以Tris緩沖液等量稀釋。
樣品進入柱床速度為1ml~2ml/min，以NaCl線形梯度洗脫。大部分單克隆IgG于40mMol/L和80mMol/LNaCl洗脫，也有極少例外的單克隆抗體于120mMol/L~150mMol/LNaCl洗脫。測OD280nm收集蛋白峰，單克隆IgG保存備用。
雜交瘤產生各種**球蛋白，但主要是IgG和IgM，究竟是哪種為主，則決定于抗原的**程序。**一次，且3天后就取脾，多為產生IgM的B**細胞。**多次的多為IgG。
酶免試劑盒，單克隆抗體， elisa試劑盒，**組化試劑盒，**組化抗體，金標快速檢測卡 ，原位檢測試劑盒，細胞凋亡檢測試劑盒
公安機關備案號：
